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引物產品使用方法

發布日期:2017-01-07

中国福彩网app www.qfhtgo.com.cn

Oligo合成產品使用說明

尊敬的客戶:

您好!

感謝您對我們的信任與支持!您在使用本公司的Oligo合成產品時請閱讀以下說明。

(1) 我們提供的合成報告上的Oligo序列是該Oligo合成時,由合成儀控制電腦及時打印的,所合成的oligo序列與此序列完全一致,如果該序列與您提交給我們的序列不同,請您立即與我們聯系。

(2) 我們所提供的Oligo是通過紫外分光光度計在260nm波長下來定量的,其摩爾消光系數是根據堿基組成和鄰位效應計算所得。我們在合成報告單上提供了每條Oligo的分子量、OD數、以及每管ODnmoleμg數等,其中DNA還提供Tm值、GC含量值等。在引物的標簽上我們同時提供了每管引物的總nmole數。

此報告單上提供的Oligo分子量均按照精確算法進行計算,公布如下:

MWDNA=#A×313.21+#G×329.21+#C×289.18+#T×304.20+#I×314.19+#U×290.17+Nmod×Wmod-61.96

MWRNA=#A×329.21+#G×345.21+#C×305.18+#U×306.20+Nmod×Wmod-61.96

注:#代表對應堿基的個數;Nmod,Wmod分別為修飾基團的數目和分子量;兼并堿基的分子量為兼并堿基的分子量總和除以兼并數。

TM值計算公式:當長度≤20mer,Tm=4(G+C)+ 2(A+T);當長度>20mer,Tm=0.41(% of GC)-675/L+81.5

注:1、L:引物堿基數:% of GC :引物GC含量;% of GC = GC個數/引物總堿基數

2、TM值計算并不保證正確,只是為實驗參數設置提供一個參考。

3 我們提供的Oligo合成產品經真空干燥呈薄膜狀或粉末狀附在離心管壁上,使用前請先離心再小心開啟,以免丟失。如您需要將引物稀釋到10 uM,需要加入該管引物的(總nmole*100 μL的無菌水或者pH8.0TE溶液,然后輕輕蓋上管蓋,震蕩混勻使其充分溶解。為了防止Oligo降解,溶解后請于-20℃保存,并避免反復凍融。尤其需要注意的是,RNA極易被RNase降解,因此必須確保在溶解以及相關實驗操作時在無RNase的環境下進行。凡Oligo使用一段時間后出現講解的,均可能與您的保存方式和實驗用水的質量相關,此類情況我公司不承擔相關責任。

4)我們提供的Oligo5’端和3’端均為羥基,可直接用于PCR。如果需要標記磷酸基團,請在提交訂單時在本公司訂購單的5’端和3’端修飾欄的下拉框內選擇Phosphate。如需其他的熒光標記和堿基修飾服務,也請在此下拉框中選擇。

5)熒光標記的產品,如FAM、HEX、TAMRA等標記的Oligo因為光敏感,需避光保存。

6)對于DNA引物我們提供PAGEHPLC純化方式。

7)引物合成是一種多步驟的化學反應,每一步的合成效率不可能達到100%,副產品不可以避免。在您PCR擴增克隆以后,建議挑取2-3個克隆進行測序。如您發現所有克隆都在引物區存在突變,請及時與我們聯系,我們會為您免費重新合成一次。

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